Ez a weboldal cookie-kat (sütiket) alkalmaz a jobb használhatóság és a kellemesebb felhasználói élmény érdekében.
A weboldalunkon történő további böngészéssel hozzájárul a cookie-k használatához. A részletes adatkezelési tájékoztatóért kattintson ide!

 
 

CRISPR/Cas9 kiegészítő egység

Katt rá a felnagyításhoz
Cikkszám: Advanced Analytical CRISPR/Cas9 kit
Gyártó: Advanced Analytical Techn., Inc.
Elérhetőség: Előrendelhető

Leírás és Paraméterek

CRISPR/Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats) kiegészítő egység

A CRIPR/Cas9 technika abból a természetes védekező mechanizmusból származik, amivel a baktériumok védekeznek a vírusfertőzések és a plazmidok ellen, egyfajta szerzett immunitás segítségével. A vírus támadásra a baktériumok egy olyan RNS szintetizálással válaszol ami illeszkedik, kapcsolódik és megtámadja a felismert vírust.

Miután a vírustámadást visszaverte, a baktérium DNS-ben rövid szekvencia ismétlések(palindrom) jelennek meg, köztük rövid spacer DNS szegmensekkel. Ezek az ismétlések és spacer DNS szekvenciák idővel beépítetté válnak minden vírustámadás után.

A 2010-es évek elején értették meg a tudósok ezt a fajta molukuláris védekezési mechanizmust. Továbbá rájöttek, hogy ez a baktérium önfenntartó stratégia alkalmas lehet nemcsak virális DNS, de bármilyen DNS szekvencia kívánt helyen történő vágására, úgy hogy változtatják a guide RNS-t és a Cas9 enzimet használva célozzuk a kívánt gént.

A guide RNS-ek(sgRNS) rövid szintetikus oligonuleotid szekvenciák, melyek komplementerei a célozni kívánt DNS szekvenciáknak.

Az sgRNS része egy hosszabb RNS molekulának amely a Cas9 enzim gépezettel riboproteint alakít ki. Ahogy a neve is elárulja, a guide RNS pozícionálja a Cas9 enzimet a megfelelő helyre, a DNS célzott vágásához.

A végeredmény egy alapvetően programozható nukleáz, amely lehetőséget biztosít gének szerkesztésére azáltal , hogy kettős szálú DNS-t bármilyen kívánt helyen vághatunk.

A CRISPR/Cas9 technika jelentős fejlődés a korábbi protein alapú gén szerkesztő módszerekhez képest, mint a Cink-ujj nukleázok(ZFN) vagy a transzkripciós aktivátorszerű effektor nukleázok (TALEN). A CRISPR/Cas9 olcsóbb és kevésbé időigényes mint a fenti módszerek, és sokkal megbízhatóbb mint a ZFN.

Ennél is fontosabb, hogy a ZFN-el és a TALEN-el ellentéten a CRISPR/Cas9 egyszerre több génen is használható, ami nagy előny összetett humán betegségek esetében, amik nem csupán egy mutációból, hanem több mutáns gén interakciójából erednek.

Így ahelyett, hogy csak egy gén vizsgálatával foglalkoznának egy időben, a kutatók kiüthetnek és bekapcsolhatnak egyszerre. A CRISPR/Cas9 sebészi pontossága óriási ugrás a korábbi technológiákhoz képes és a tudósok még tovább fejleszthetik konkrét nukleotidok célzásával adott génekben.

A génszerkesztés hatékonyságának mérése, függvénye a guide RNS és Cas9 fehérje transzfekciós hatékonyság mérésének. A transzfekció olyan molekuláris mechanizmus, amely során kémiai vagy nem kémiai módszer segítségével, idegen DNS-t juttattunk egy sejtbe.

A génszerkesztés hatékonysága szintén függ attól, hogy milyen javító mechanizmus történik a DNS vágás helyén. Általában két féle javító mechanizmus létezik: a nem homológ vég-a-véghez illesztés (NHEJ) és a homológ javítás (HDR). Az NHEJ gyakran eredményez olyan kis inzerciókat és/vagy deléciókat, amelyek elrontják a gén funkcióját. A HDR homológ DNS-t hoz létre, így a tudósok sokféle génmódosítást végezhetnek különböző kívánt szekvenciájú donor DNS molekulák beillesztésével.

A pont a következő: A kutatók akár NHEJ akár HDR repair mechanizmust használnak, az AATI Fragment Analizátor gyorsan meghatározza a CRISPR/Cas9 kísérletek génszerkesztő hatékonyságát.

Itt van, hogy: Először miután létrejön az első mutáció a CRISPR/Cas9 rendszer segítségével, a DNS kivonásra kerül és amplifikálódik specifikus PCR primereket alkalmazva. Ezután, a hetero duplex DNS-t egy olyan enzim vágja, amely felismeri a kívánt nukleotidokat. A Fragment Analizátor gyorsan és egyszerűen azonosítja ezeket a vágott DNS fragmenteket, amik jellemzőek a CRISPR/Cas9 gén mutációk meglétére.

Az egyik ügyfelünk az INTEGRATED DNA TECHNOLOGIES a biotech iparban az oligonukleotidok egyik fő gyártója sok CRISPR/Cas9 kísérletet végzett a Fragment Analizátorral illetve ő a fejlesztője a  gBlocks Gene Fragments Kit-nek a CRISPR/Cas9 applikációhoz.

Partnereink
Segíthetünk?